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超低分子量蛋白電泳試劑盒
 產品貨號: RTD6120
 產品名稱: 超低分子量蛋白電泳試劑盒
 產品價格/規格: 10次/1000元
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 更新時間: 2019-10-18
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  • 超低分子量蛋白電泳試劑盒(貨號:RTD6120

    ●     產品組成:

    組分貨號

    組分

    名稱

    規格

    貯存

    RTD6121

    組分1

    2×多肽電泳分離膠緩沖液

    30 ml

    4

    RTD6122

    組分2

    2×多肽電泳濃縮膠緩沖液

    15 ml

    4

    AC1914

    組分3

    40%PAA(19:1)

    25 ml

    4

    AC2914

    組分4

    40%PAA(29:1)

    5 ml

    4

    AA0486

    組分5

    10% APS(干粉)

    0.5 g

    室溫

    TA0761

    組分6

    TEMED

    1 ml

    室溫

    AB080

    組分7

    10×陽極緩沖液(下槽緩沖液)

    250 ml

    常溫

    CB010

    組分8

    10×陰極緩沖液(上槽緩沖液)

    200 ml(干粉)

    室溫

    TP050

    組分9

    2×Tricine 上樣緩沖液(含還原劑)

    1 ml

    -20

    RTD6201

    組分10

    考馬斯亮藍快速染色液

    500 ml

    4

    產品簡介:

    本試劑盒含有超低分子量蛋白電泳(多肽電泳)全套試劑,可以用來檢測1-20kd的多肽大小。本試劑盒可配制至少10塊常規大小的PAGE膠(8×10cm)。具有以下特點:

    1 適用范圍廣:2×電泳緩沖液中不含有SDS,適用于多肽的變性和非變性電泳。

    2 分辨率高:凝膠緩沖液獨特配方,可以有效分離1-5kD多肽。

    3 穩定性高:凝膠緩沖液pH為中性,存放時間長。

    使用說明:

    . 10% APS配制:

    10% APS配制-5 ml將0.5 gAPS干粉溶于5 ml滅菌水中,徹底溶解后分裝,1 ml/支,-20℃備存,每次取一管使用。10% APS應盡量減少室溫存放時間,以防失效。10%APS在4℃有效期為一周,-20℃有效期6個月。若發現凝膠聚合時間延長,應考慮更換使用-20度保存的10%APS。

    . 制膠:

    I 配制分離膠

    1.按照表一將不同體積的成分加入到小燒杯或離心管中混合;立即混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

    2.在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液,然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-3 cm的水層,使凝膠表面保持平整。

    3.靜置10-20分鐘,待分離膠和水層之間出現一個清晰的界面表示凝膠已聚合。

    表一  (一塊0.75mm mini膠用量)*

     

    分離膠

    濃縮膠

     

    18T, 5%C /5.0 ml

    5T, 3.3%C/2 ml

    2×多肽電泳濃縮膠緩沖液

    /

    1 ml

    2×多肽電泳分離膠緩沖液

    2.5 ml

    /

    40%PAA19:1

    2.25 ml

    /

    40%PAA29:1

    /

    0.25 ml

    0.25 ml

    0.75 ml

    10APS

    45-60 μl**

    20-30 μl

    TEMED

    5 μl

    2 μl

    注:*  如非必須,不要使用厚度1.0mm和1.5mm的凝膠,盡量使用厚度0.75mm的凝膠,這樣會減少電泳后染色和脫色的時間。

    ** 凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時,聚合較快;冬天氣溫低時,聚合時間會延長。可以根據環境溫度的不同調節APS的加入量。

    II 配制濃縮膠

    去除覆蓋在分離膠上的水層,用濾紙將殘留的水吸去。

    1.按照表一將不同成分加入到小燒杯或離心管中混合;立即混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

    2.將梳子插入凝膠內,避免產生氣泡。

    3.靜置30-60分鐘待凝膠聚合

    . 電泳:

    電泳前,將10×陽極緩沖液AB080)稀釋成1×陽極緩沖液備用;按照標簽說明配制10×陰極緩沖液,用蒸餾水稀釋成1×陰極緩沖液備用。將電泳槽的外槽加入1×陽極緩沖液,內槽加入1×陰極緩沖液,輕柔拔出梳子,將Marker或蛋白樣品(已經過2×Tricine上樣緩沖液[TP050]處理)加入點樣孔,150V穩壓電泳,至藍色指示前沿至分離膠3/4位置時即可停止電泳(表二)。整個電泳過程大約需要2.5-3個小時。

    注:如果電泳時間過短,染色時,指示前沿容易遮擋小于5kd的小肽。

    表二 多肽電泳標準電泳條件

    電壓

    150V

    開始電流

    60-75mA

    結束電流

    15-25mA

    電泳時間

    2.5-3小時

     

    . 染色(使用組分8-考馬斯亮藍快速染色液):

    用前必讀:

    a 考馬斯亮藍快速染色液不同于實驗室常用的考馬斯亮藍G-250染色液(0.025% G-250,10%冰醋酸),快速染色液不僅具有染色多肽功能外,還具有固定小肽的作用,使得小肽不容易在染色和脫色中從PAGE中漂離。常規的G-250染色液在染色中,低于5KD的小肽容易從膠中漂離。

    b 使用前如發現瓶中有少許沉淀,請混勻后使用。

    c 以下“使用方法”是針對0.75mm厚度,10×10cm凝膠染色程序。

    1. 漂洗:

    將電泳后的PAGE膠取下放入微波爐專用塑料容器中,加入適量超純水(以剛剛覆蓋過膠面為適),微波爐中高火(700-800瓦)加熱,至溶液沸騰后繼續煮沸1-2分鐘;取出容器均勻搖動數下;重復上述步驟2-3次;棄盡水溶液。

    2. 染色:

    加入適量染色液(用量根據凝膠面積的大小及容器大小而定,以浸沒膠面為準),放入微波爐中高火(700-800瓦)加熱,溶液沸騰后繼續煮沸1-2分鐘;取出容器均勻搖動數下;重復上述步驟數次,直至蛋白條帶清晰可見時即可停止加熱;棄去染色液(收集到備用容器中,可以反復利用1-2次)。

    注:a 此步驟是染色的關鍵步驟,染色停止的標準是條帶清晰可見。如由于揮發導致染色液減少,可適當補加染色液。

    b 如使用1.0mm或更厚的凝膠,染色煮沸時間會相應延長。

    3. 脫色:

    加入適量超純水(以剛剛覆蓋過膠面為適),放入微波爐中高火(700-800瓦)加熱,至溶液沸騰后繼續煮沸1-2分鐘;取出容器均勻搖動數下;重復上述步驟1-2次,此時PAGE膠的藍色背景應已去除

    4. 保存:

    棄去水溶液,加入適量超純水,觀察和保存染色結果。

    染色液使用注意事項:

    1) 使用方法中的各種參數僅針對面積8×10cm或10×10cm,厚度0.75mm的凝膠,如果使用更大面積或更厚的凝膠,請加入更多的染色液并延長各步驟的時間。

    2) 本染色液可以重復利用1-2次,敏感性沒有明顯下降。

    3) 本染色液有輕微腐蝕性,請帶手套操作。使用后,請蓋好瓶蓋,4℃密封保存。

     

    緩沖液配方

    1 40%PAA(19:1)(100ml) (Cat:AC1914)

    丙稀酰胺       38g

    甲叉雙丙稀酰胺 2g

    用ddH2O溶解后定容至100ml,過濾后使用。

    2 40%PAA(29:1)(100ml) (Cat:AC2914)

    丙稀酰胺       38.67g

    甲叉雙丙稀酰胺  1.33g

    用ddH2O溶解后定容至100ml,過濾后使用。

    3 10x 陽極緩沖液 (500 ml)    (Cat:AB080) 

    組分濃度:2 MTris pH8.9

    Tris base 121.1 g

    adjust the pH to 8.9 at25

    ddH2O     to 500 ml 

    4 10x 陰極緩沖液 (1 L)    (Cat:CB010) 

    組分濃度:1 MTris,1 MTricine, 1% SDS, pH 8 .3

    Tris base 121.1 g

    Tricine    179.2 g

    SDS         10 g

    ddH2O     to1 L 

    Do not adjust the pH (~pH 8.3)

    5 2×Tricine蛋白樣品加樣緩沖液(10ml)  (Cat:TP050)

    組分濃度:100 mMTris-HCl, pH 6.8, 24% glycerol, 8% SDS,0.2MDTT,0.02% Coomassie Brilliant Blue G-250,

    1ml 1MTris-Cl pH6.8

    2.4ml 甘油

    0.8g  SDS

    0.31gDTT

    2mg 考馬斯亮藍G-250

    用滅菌ddH2O定容至10ml

    混勻分裝-20℃貯存備用



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