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凝血酶 Thrombin
 產品貨號: RT1040
 產品名稱: 凝血酶 Thrombin
 產品價格/規格: 1000U 400元
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 更新時間: 2019-06-24
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  •  限制級凝血酶

    Thrombin, Restriction Grade

    產品包裝:

    產品編號

    產品名稱

    產品包裝

    貯存

    RT1040-01

    限制級凝血酶

    1000 U

    -20

    RT1040-02

    1×Thrombin Dilution/Storage buffer

    2 ml

    -20

    RT1040-03

    10×Thrombin Cleavage buffer

    1 ml

    -20

     

    說明書

    一份

     

    產品簡介:

    凝血酶(Thrombin)來源于牛血漿,分子量37KD,是由兩條肽鏈(31KD6KD)通過二硫鍵組成的。凝血酶是一種廣泛用于切割標簽的蛋白酶,通常能夠有效切割質量比為1:2000的蛋白。凝血酶最佳切割位點是X4-X3-P-R[K]-X1'-X2'X4 X3 是疏水氨基酸而X1' X2'是非酸性氨基酸),一些經常使用的識別位點是L-V-P-R-G-S,L-V-P-R-G-F,M-Y-P-R-G-N。在X4-X3-P-R-G-X2'之間切割比在X4-X3-P-K-L-X2'更有效。在凝血酶切割位點和N末端標簽之間插入五個甘氨酸殘基可改善酶切,通過這一"甘氨酸連接肽"只需較少酶量就可達到完全切割,而且也可以避免可能發生的錯誤切割。凝血酶可從切割產物中用p-氨基瓊脂糖親和純化,或者苯甲脒瓊脂糖移去。

    單位定義:1 U在標準切割緩沖液里20 16小時能切割1mg的目的蛋白。

    保存條件:

    -20℃保存,一年有效。

    使用方法:

    1 用0.1ml 1×凝血酶稀釋/貯存緩沖液(1×Thrombin Dilution/Storage buffer)(50 mMsodium citrate,200 mMNaCl, 0.1% PEG-8000, 50% glycerol, pH 6.5)徹底溶解1000 U凝血酶粉末,得到凝血酶母液,濃度為10U/μl。

    2 用1×凝血酶稀釋/貯存緩沖液將凝血酶母液按照1:25,1:50,1:100,1:200進行梯度稀釋,稀釋液含有大約每μl 0.4U,0.2U,0.1U,0.05U凝血酶。

    3 按照下表配制反應液;

    10×Thrombin Cleavage Buffer

    5 μl

    目的蛋白

    10 μg

    凝血酶稀釋液(含有不同U的凝血酶)

    1 μl

    超純水

    x μl

    總體積

    50 μl

    4 常溫(20-25℃)孵育,2小時,4小時,6小時,8小時分別取樣10μl與5×SDS-PAGE上樣緩沖液混合后電泳檢測,確定酶切程度。


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