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10×RealBlot快速轉膜液
 產品貨號: RT5020
 產品名稱: 10×RealBlot快速轉膜液
 產品價格/規格: 500ml 200元
 產品說明書: 點擊查看
 更新時間: 2019-10-11
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  • 10×RealBlotTM 快速轉膜液

    10×RealBlotTM Rapid Transfer buffer

    產品組成:

    貨號

    名稱

    規格

    保存條件

    RT5020

    10×RealBlotTM快速轉膜液

    500 ml

    RT

    說明書

    一份

    產品簡介:

    快速轉膜液使用獨特配方,能高效快速地將蛋白轉移到印跡膜(PVDF或硝纖膜)上。使用濕轉法(Tank blot)或半干轉法(Semi-dry blot)方法,能在15-35分鐘內完成轉膜過程。

    快速和環保:快速轉膜液不使用甲醇,減輕了對實驗者和環境的傷害。

    兼容性好:快速轉膜液能兼容Laemmli膠,預制膠,Bis-Tris膠等多種凝膠。

    轉移效率高:快速轉膜液對分子量跨度較大的蛋白也有很好的轉移效率,有效解決了大小蛋白不能在同一張膜上同時轉移的問題。

    貯存:

      18-26常溫貯存,有效期一年。

    使用說明:

    轉膜前的準備:

    5-6張裁好的濾紙;裁好的轉印膜;足夠的1×快速轉移buffer

    一 濕轉法(Tank blot):

    1 按照下表配制1×快速轉膜液


    1×快速轉膜液配制量

    100 ml

    500 ml

    1000 ml

    10×快速轉膜液

    10 ml

    50 ml

    100 ml

    無水乙醇

    20 ml

    100 ml

    200 ml

    超純水

    70 ml

    350 ml

    700 ml

    2 將濾紙和海綿浸泡在1×快速轉膜液中,完全浸濕。

    3 將凝膠在超純水中浸泡漂洗2分鐘,去除膠表面的SDS;隨后將凝膠浸泡在1×快速轉膜液中。

    注意:水中漂洗時間一定不能超過2分鐘,否則分子量較大的蛋白不能完全轉移。

    4 按照以下順序做好轉印三明治結構:

    負極(陰極)

    一塊海綿

    2mm濾紙

    凝膠

    轉印膜

    1mm濾紙

    一塊海綿(根據三明治的厚度選擇是否使用)

    正極(陽極)

    注意:   要徹底清除三明治結構中的氣泡,適當補加1×快速轉膜液保持三明治結構濕潤。

      PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕30秒。

      三明治結構的制作不能太緊,也不能太松。太緊和太松都會影響轉印效果。如果太緊的話,可以去除陽極一側的海綿或濾紙。

    5 將三明治結構放于轉移槽中。

    注:轉移槽中可以不用1×快速轉膜液,可以用1×TGS(Tris-Glycine-SDS)電泳緩沖液取代。三明治結構中的快速轉膜液足夠保證轉膜的完成。

    二 半干轉(Semi-dry blot):

    1 按照下表配制1×快速轉膜液:

    1×快速轉膜液配制量

    100 ml

    500 ml

    1000 ml

    10×快速轉膜液

    10 ml

    50 ml

    100 ml

    無水乙醇

    20 ml

    100 ml

    200 ml

    超純水

    70 ml

    350 ml

    700 ml

    2 將濾紙浸泡在1×快速轉膜液中,完全浸濕。

    3 將凝膠在超純水中浸泡漂洗2分鐘,去除膠表面的SDS;隨后將凝膠浸泡在1×快速轉膜液中。

    注意:水中漂洗時間一定不能超過2分鐘,否則分子量較大的蛋白不能完全轉移。

    4 按照以下順序做好轉印三明治結構:

    負極(陰極)

    下層濾紙

    凝膠

    轉印膜

    上層濾紙

    正極(陽極)

    半干轉時,濾紙、膠、膜之間的大小,一般是下層濾紙>=>=>=上層濾紙。上下兩層的濾紙一定不能接觸;濾紙、膠、膜之間千萬不能有氣泡。接觸的濾紙和氣泡會造成短路。


    注意:PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕30秒。

           

    三 轉移條件:

    推薦使用恒流轉移

    電流

    轉移時間

    300 mA

    30 to 35 min

    330 mA

    25 to 30 min

    350 mA

    25 to 30 min

    375 mA

    20 to 25 min

    400 mA

    15 to 20 min

     



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