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植物總蛋白提取試劑盒(適用于模式植物)
 產品貨號: RTD8102
 產品名稱: 植物總蛋白提取試劑盒(適用于模式植物)
 產品價格/規格: 20次 300元
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 更新時間: 2019-10-18
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  • 植物總蛋白提取試劑盒(適用于模式植物)

    Plant Total Protein Isolation Kitfor model plant

    產品貨號及規格

    產品編號

    名稱

    規格

    貯存

    運輸

    RTD8102-01

    試劑A-樣本雜質去除劑

    20 ml

    常溫

    常溫

    RTD8102-02

    試劑B-植物蛋白提取緩沖液I

    15 ml

    4

    常溫

    PC2030-03

    蛋白酶抑制劑混合物(100×,植物樣品用)

    0.2 ml

    -20

    濕冰

    DT0140

    DTT100×)

    1 ml

    常溫(配制后-20)

    常溫

    PL080

    5×MonoClolor 蛋白上樣緩沖液

    1 ml

    -20

    濕冰

    產品簡介

    本產品用于快速提取模式植物的總蛋白,可以處理各種常見模式植物如擬南芥、小麥、煙草、玉米、水稻等植物的葉片、莖和根等。得到的蛋白可用于SDS-PAGE凝膠電泳和Western印跡分析。

    該試劑盒對模式植物的幼嫩組織有更好的提取效果,衰老組織和富含多糖多酚植物的蛋白提取效果不佳。此類植物的蛋白提取可以選擇通用型植物蛋白提取試劑盒(貨號:RTD8103)。

    該試劑盒含有除丙酮外的其他所有試劑,使用方便,能在2小時內得到高純度的蛋白樣品。

    每次提取使用0.7 ml試劑B-植物蛋白提取緩沖液I計算,該試劑盒可以使用20次。

    ●    使用方法:

    實驗準備材料:

    液氮;研缽;1.5ml離心管;丙酮;70℃水浴鍋;干浴器;冷凍離心機;制冰機;渦旋振蕩器。

    I 樣品破碎

    1. 取植物樣本(每個樣本取0.2-0.5),在液氮條件下,用研缽充分研磨成粉末。

    注:此步驟非常重要,樣本研磨越細越好,研磨不徹底會導致蛋白濃度偏低。

    II 沉淀雜質:

    2. 取1.5 ml離心管,加入1 ml即用型試劑A(按照下表配制),迅速將粉末加入其中,漩渦混勻,RT 放置5分鐘。

    即用型試劑A-樣本雜質去除劑配制

     

    即用型試劑A

     

    1個樣品

    2個樣品

    n個樣品

    試劑A-樣本雜質去除劑

    0.5 ml

    1 ml

    n×0.5 ml

    丙酮

    0.5 ml

    1 ml

    n×0.5 ml

    DTT100×

    10 μl

    20 μl

    n×10 μl

    3.12000g4離心5分鐘,去除上清,保留沉淀。

    注:觀察沉淀顏色,如沉淀顏色為綠色,繼續步驟4;如沉淀顏色為淺色或白色,跳過步驟4,直接進行步驟5

    4. 沉淀中加入1 ml即用型試劑A,漩渦混勻,RT放置5分鐘,12000rpm4離心5分鐘。

    5. 沉淀中加入1 ml 預冷的丙酮(自備,試劑盒不提供)和10 μl DTT溶液,漩渦震蕩(此時溶液狀態應為白色懸液),徹底重懸,12000rpm4離心5分鐘,去除上清,收集沉淀。

    6. 快甩離心數秒,殘留上清用移液器徹底吸棄,沉淀物通風晾干1-2分鐘至沉淀干燥。

      注:沉淀不能過分干燥,否則會影響以下步驟蛋白的溶解性。

    III 蛋白提取

    7. 蛋白沉淀中加入0.7 ml 即用型試劑B(按照下表配制),漩渦震蕩,徹底重懸沉淀(此時溶液狀態為懸浮溶液);70水浴1小時,間歇混勻。

    即用型試劑B-植物蛋白提取緩沖液配制:

     

    即用型試劑B

     

    1個樣品

    2個樣品

    n個樣品

    試劑B-植物蛋白提取緩沖液I

    0.7 ml

    1.4 ml

    n×0.7 ml

    蛋白酶抑制劑混合物(100×

    7 μl

    14 μl

    n×7 μl

    DTT100×

    7 μl

    14 μl

    n×7 μl

    8.12000g4離心10分鐘,小心取上清(通常可取600 μl)于1.5ml離心管中,不要吸取沉淀。

    9. 蛋白樣品-20℃貯存或進行下游電泳及Western Blot等實驗。

    注:   如要濃縮蛋白,可以選擇蛋白濃縮試劑盒(貨號:RTD9101)。

               由于提取過程中使用了DTT,為了避免對蛋白濃度測定的影響,建議蛋白濃度測定使用Bradford方法(貨號:RTP7101)。



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