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產品分類
 
·PCR
 
 
 





2×pfu PCR MasterMix
 產品貨號: RTH3103/3104
 產品名稱: 2×pfu PCR MasterMix
 產品價格/規格: 500μl/5×500μl
 產品說明書: 點擊查看
 更新時間: 2019-10-11
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    2×pfu PCR MasterMix

    產品包裝:

     

     

    目錄號

    包裝

    價格

    2×pfu PCR MasterMix(不含染料)

    RTH3103-02

    500μl

    100

    RTH3103-03

    5×500μl

    400

    2×pfu PCR MasterMix(含染料)

    RTH3104-02

    500μl

    100

    RTH3104-03

    5×500μl

    400

    注:以50μl PCR反應體系為例,每次使用25μl 2×MasterMix500μl可做20 50μl PCR反應。

    儲存條件: -20℃可長期保存;4穩定貯存3個月。經常使用時,一旦融化后請4貯存,盡量避免反復凍融。

    產品簡介:

    本產品包含pfu DNA聚合酶、dNTPsMg2+、反應緩沖液、PCR反應的增強劑和優化劑以及穩定劑,濃度為2×。使用時,只需補加實驗所需的引物和模板后即可進行PCR反應,可最大限度的減少人為誤差,具有快速簡便、穩定性好等優點。用于高保真的DNA片段的擴增。使用該產品得到的PCR擴增產物為平滑末端,不可以直接用于TA克隆,要通過平滑末端克隆法進行克隆。

    質量控制:

    以λ DNA為模板,可以很好擴增5kbDNA片段;以水稻基因組為模板,可以很好擴增3.2kbDNA片段。

         使用說明:

    1. 冰浴中徹底融化2×MasterMix,混勻后Minispin將溶液收集到管底。

    2. 按照下表在0.2ml PCR管中制備反應體系:

     

    50μl反應體系

    終濃度

    2×MasterMix

    25μl

    上游引物 10μM

    1-5μl

    0.2-0.8 μM

    下游引物 10μM

    1-5μl

    0.2-0.8 μM

    模板

    × μl

    10pg-1μg

    補至50μl

     

    3. 快甩離心將反應液收集到管底。

    4. PCR儀如果沒有熱蓋加熱的話,補加25μl礦物油。

    5. PCR儀上執行以下程序:

    步驟

    溫度

    時間

    循環數

    初始變性

    94

    5 min

    1

    變性

    94

    30 sec

    25-40*

    退火

    Tm-5*

    30 sec

    延伸

    72

    0.5kb/min

    最后延伸

    72

    5 min

    1

    *注: PCR 反應條件視模板、引物等的結構條件不同而各異。在實際操作中需根據模板、目的片段的大小、堿基序列和引物的長短等具體情況,設定最佳的反應條件(溫度、時間等)。

    6. 電泳檢測。

     注:使用含染料的2×MasterMix可以直接上樣;不含染料的2×MasterMix要與6×loading buffer混合后上樣。



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